Ресуспендуйте осад не менше 300 мкл ДАПІ. Загалом вам потрібні клітини в концентрації 2 x 106/ мл DAPI. Клітини можна негайно пропустити на проточному цитометрі або залишити на льоду в темряві до кінця дня. Клітини також можна заморозити для аналізу пізніше.
Проточна цитометрія: один раз промийте зразки в інкубаційному буфері. Розведіть основний розчин DAPI до концентрації між 1,60-0,400 мкг/мл у PBS та інкубуйте протягом 15 хвилин при кімнатній температурі в темряві перед аналізом клітин на проточному цитометрі.
Протокол протифарбування. Відцентрифугуйте клітинну суспензію (з кроку 2.6) і видаліть супернатант. Натисніть, щоб розпушити осад, і додайте 1 мл DAPI, розведеного в буфері для фарбування. Інкубуйте 15 хвилин при кімнатній температурі. Проведіть аналіз за допомогою проточної цитометрії в присутності барвника.
1 мкг/мл DAPI є дещо менш проникливим для клітинної мембрани та більш токсичним, ніж барвники Hoechst, і тому є кращим для фарбування фіксованих клітин, ніж для фарбування живих клітин. Як фіксовану клітинну фарбу ми рекомендуємо концентрацію DAPI при 1 мкг/мл, хоча фарбування живих клітин за допомогою DAPI можна проводити при вищих концентраціях (зазвичай 10 мкг/мл).');})();(function(){window.jsl.dh('TdG1ZovwBrC9ptQP1tmOsQg__50','
Рекомендована концентрація клітин становить 1 х 106/зразок, але 5 x 105/зразок є мінімумом потрібно. Клітини необхідно суспендувати в об’ємі 0,25 – 1,0 мл. У випадку живих клітин слід використовувати барвник для життєздатності, щоб виключити з аналізу мертві клітини з вищою автофлуоресценцією.
4',6-діамідіно-2-феніліндол (DAPI) є блакитна флуоресцентна пляма нуклеїнової кислоти, яка зв’язується з дволанцюговою ДНК і, здається, зв’язується з кластерами AT у малій борозенці молекули ДНК.